Identification of Brucella abortus biovar 4 of bovine origin in Colombia / Identificación de Brucella abortus biovar 4 de origen bovino en Colombia

The objective of this study was to identify twelve Brucella abortus isolates of bovine origin from the department of Nariño in Colombia up to the biovar level. These isolates are included in the collection of the Germplasm Bank of Microorganisms of Animal Health Interest -Bacteria and Virus (BGSA-BV). The identification was carried out through conventional methods such as macro and microscopic morphological descriptions, enzymatic activity, biochemical profile, substrate use and sensitivity to dyes. Complementary genotypic characterization was carried out using multiplex PCR for B. abortus, Brucella melitensis, Brucella ovis, and Brucella suis-Erytritol (AMOS-ERY-PCR), RFLP-IS711, by southern blot hybridization, as well as by the multiple locus variable number of tandem repeat analysis (MLVA) using the ery gene and the insertion sequence IS711 and variable number of tandem repeats (VNTR) as molecular markers. The results of the phenotypic and molecular characterization allowed to identify twelve isolates as B. abortus biovar 4 as well as to differentiate field from vaccine strains. This is the first study on the phenotypic and molecular identification of B. abortus isolates in Colombia. It was concluded that the phenotypic and molecular identification of twelve isolates as B. abortus biovar 4 could be achieved using conventional and molecular techniques with enough resolution power. The identification of these isolates to the biovar level in taxonomic and epidemiological terms will allow the use of this genetic resource as reference strains in future research. This finding constitutes the basis for identifying biotypes not previously reported in the country that might be useful to support brucellosis survey programs in Colombia.

El objetivo de este estudio fue identificar 12 aislamientos de Brucella abortus de origen bovino procedentes del departamento de Narino, Colombia, hasta la descripción de biovar. Estos aislamientos conforman la colección del Banco de Germoplasma de Microorganismos de Interés en Salud Animal, Bacterias y Virus. La identificación se hizo mediante métodos convencionales, como la descripción morfológica macro y microscópica de actividad enzimática, de perfiles bioquímicos, de utilización de sustratos y de sensibilidad a colorantes. Se hizo una caracterización genotipica complementaria mediante PCR múltiple para Brucella abortus, Brucella melitensis, Brucella ovisy Brucella suis-eritritol (AMOS-ERY-PCR); RFLP-/S7II; hibridación Southern blot y análisis multi-locus de repeticiones en tándem de número variable (MLVA), empleando como marcadores moleculares el gen ery, la secuencia de inserción /S711 y el número variable de repeticiones en tándem (VNTR). Los resultados de la caracterización fenotípica y molecular permitieron identificar 12 aislamientos de campo como B. abortus biovar 4 y diferenciar cepas de campo de cepas vacunales. Este es el primer estudio de identificación fenotípica y molecular de aislamientos de B. abortus en Colombia. Por su importancia taxonómica y epidemiológica, la identificación de estos aislamientos hasta el nivel de biovar permitirá disponer de recursos genéticos que se pueden emplear como cepas de referencia en futuras investigaciones. Estos resultados pueden considerarse como una base para la identificación de biotipos no reportados en el país y podrán ser utilizados en programas de monitoreo y vigilancia de la brucelosis bovina en Colombia.

Evaluation of dot-blot test for serological diagnosis of bovine brucellosis

Abstract The objective of this study was to standardize and validate the dot-blot test for the serological diagnosis of bovine brucellosis, compare the results with those found in the 2-mercaptoethanol (2-ME) and complement fixation test (CF), and estimate the relative sensitivity and specificity of the dot-blot compared to these tests. Fifty bovine blood serum samples were used for the test standardization, and 1315 samples were used for evaluation and comparison between the tests; the results were compared using the Kappa indicator. At the end of standardization, it was established as optimal for the antigen obtained from Brucella abortus B19 after passing through a microorganism rupture process, the blood serum samples diluted at 1:100, and the conjugate at 1:30,000. The comparison of the dot-blot results with 2-ME showed Kappa index of 0.9939, sensitivity of 99.48%, and specificity 99.91%, with CF, Kappa index of 0.8226, sensitivity 100% and specificity 95.32%. Using the combination of the test results 2-ME and CF to establish the true condition of the animal, the dot-blot showed relative sensitivity of 100%, and relative specificity of 99.91%. The evaluated test proved to be effective and reliable, besides being easy to handle and interpret the results.

Brucellosis in water buffaloes / Brucelose em bubalinos

The domestication of water buffaloes (Bubalus bubalis) originated in India and China and spread throughout the world and represents an important source of food of high biological value. Given the importance and relevance of brucellosis for buffalo production, this article reviews the history, etiopathogenesis, epidemiology, clinical signs, anatomopathological findings, diagnosis and control of the disease, focusing on data from studies on water buffaloes performed in different countries and the Brazilian Amazon biome.(AU)

A domesticação do búfalo (Bubalus bubalis) ocorreu particularmente na Índia e China, difundindo-se pelo mundo, gerando fontes de alimento de alto valor biológico. Diante da importância e relevância da brucelose para a bubalinocultura este trabalho tem por objetivo fazer uma revisão acerca do histórico da doença, etiopatogenia, fatores epidemiológicos, sinais clínicos, achados anatomopatológicos, diagnóstico e o controle, com enfoque nos dados obtidos em estudos em bubalinos no mundo e no Bioma Amazônico brasileiro.(AU)

Brucella abortus detected in cheese from the Amazon region: differentiation of a vaccine strain (B19) from the field strain in the states of Pará, Amapá and Rondônia, Brazil / Brucella abortus em queijos na região amazônica: diferenciação em cepa vacinal (B19) ou de infecção a campo nos estados do Pará, Amapá e Rondônia

Brucellosis is an infectious-contagious disease responsible for significant economic losses to the meat and milk supply chain, because it causes reproductive disorders in animals and is a chronic anthropozoonosis. This study was designed to detect the DNA of Brucella spp. in cheese and to differentiate between a vaccine strain (B19) and the field strain. Sixty-six samples of different cheeses which are produced and marketed in three states of the Brazilian Amazon region (Amapá [5 samples], Pará [55 samples] and Rondônia [6 samples]) were evaluated. Thirty-nine of these samples were from cheeses made from cow's milk, and 27 were from cheeses made from buffalo milk. Four of the 66 samples were from cheeses produced in milk processing plants regulated by the Federal Inspection Service (Serviço de Inspeção Federal); nine of the samples were from cheeses produced in processing plants regulated by the State Inspection Service (Serviço de Inspeção Estadual); five of the samples were from artisanal cheeses; and the remaining 48 samples were from informally produced cheese. DNA was obtained from the samples following a DNA extraction protocol, and PCR was conducted using primers B4 and B5 to detect Brucella spp. Primers eri1 and eri2 were used to differentiate the field strain from the B19 vaccine strain. The results showed that 21.21% (14/66) of the samples were positive for Brucella spp., of which 21.43% (3/14) were positive for the B. abortus field strain, and 7.14% (1/14) were identified as harboring vaccine strain B19. These results demonstrate that it is possible to identify Brucella spp. in cheese from the Amazon region using the PCR technique and to differentiate the B. abortus field strain from the B19 vaccine strain.(AU)

A brucelose é uma enfermidade infecto-contagiosa que causa grandes perdas econômicas à cadeia produtiva da carne e do leite, como consequência dos distúrbios reprodutivos nos animais, além de ser uma antropozoonose crônica. O objetivo deste estudo foi detectar DNA de Brucella spp. e fazer a distinção da cepa vacinal (B19) da cepa de infecção de campo. Foram adquiridas 66 amostras de diferentes queijos produzidos e comercializados em três estados pertencentes à Amazônia brasileira: Amapá (05), Pará (55) e Rondônia (06), somando 39 amostras de queijo de vaca e 27 de búfala. Deste total quatro eram produzidas em estabelecimentos com fiscalização de Serviço de Inspeção Federal, nove em estabelecimentos com Serviço de Inspeção Estadual, cinco eram de produção artesanal e as demais 48 amostras eram provenientes de produção informal. O DNA das amostras teste foi obtido por um protocolo de extração e a reação em cadeia pela polimerase foi realizada utilizando os oligoiniciadores B4 e B5 para detectar Brucella spp. e, os oligoiniciadores eri1 e eri2 para diferenciar cepa de infecção a campo da cepa vacinal B19. Os resultados mostraram que 21,21% (14/66) das amostras foram positivas para Brucella spp., destas 21,43% (3/14) foram positivas para B. abortus cepa de campo e 7,14% (1/14) foi identificada como cepa vacinal B19. Concluiu-se que foi possível identificar pela técnica da PCR Brucella spp. em queijos na região amazônica, além de diferenciar as cepas em amostra de B. abortus de infecção a campo ou cepa vacinal B19.(AU)

Detecção de Brucella abortus em linfonodos de búfalas (Bubalus bubalis) em diferentes fases da gestação / Detection of Brucella abortus in lymph nodes of buffalo cows (Bubalus bubalis) at different stages of pregnancy

O objetivo do presente trabalho foi verificar a presença do DNA de Brucella abortus e caracterizar as lesões causadas por esse agente em linfonodos de búfalas. Foram utilizadas 19 búfalas em diversos estágios de gestação, sorologicamente positivas para brucelose, submetidas ao abate sanitário, das quais se coletou fragmentos de diversos linfonodos. A idade fetal foi determinada através de exames ultrassonográficos associados à mensuração dos fetos durante a necropsia. Amostras foram coletadas e submetidas à qPCR e histopatologia. A detecção de DNA de B. abortus nos linfonodos das búfalas avaliadas foi verificada a partir do quarto mês de gestação em sete búfalas e em uma búfala pós-parição. Os achados histológicos foram linfadenite aguda a crônica. A presença de DNA de B. abortus foi detectada em todos os grupos de linfonodos avaliados, sendo que os linfonodos mais acometidos foram os mamários...

The objective of this study was to detect Brucella abortus in lymph nodes of buffaloes as well as to describe the lesions caused. Nineteen buffalo cows in various stages of pregnancy, serologically positive for brucellosis and subjected to culling were used. Fetal age was determined by ultrasound examination and the size of fetuses was measured at necropsy. Fragments of lymph nodes were collected for histopathology and qPCR. The detection of B. abortus DNA in the lymph nodes was checked from the fourth month of pregnancy in seven buffaloes and in a post-calving buffalo. Acute to chronic lymphadenitis was histologically diagnosed. B. abortus DNA was detected in all evaluated groups of lymph nodes; the mammary lymph nodes were the most affected...

Infecção transplacentária e intrauterina por Brucella abortus em búfalos (Bubalus bubalis) / Placenta and intrauterine infection by Brucella abortus in buffaloes (Bubalus bubalis)

O objetivo deste trabalho foi verificar a presença de Brucella abortus e as lesões causadas por esse agente nos anexos fetais e nos fetos de búfalas. Para isso, 20 búfalas em diversos meses de gestação, sorologicamente positivas para brucelose, foram submetidas ao abate sanitário. A idade fetal foi determinada através de exames ultrassonográficos associados à mensuração dos fetos durante a necropsia. Do útero fechado desses animais foram coletadas amostras para histopatologia e qPCR. A partir do segundo mês de gestação foi possível detectar a presença de DNA de B. abortus em líquido amniótico, líquido alantoide e em útero e, a partir do quinto mês, na placenta, coração, baço, rim, pulmão, intestino, fígado e linfonodos dos fetos. Os principais achados anatomopatológicos foram placentite fibrinopurulenta necrótica e endometrite supurativa crônica...

The objective of this study was to detect Brucella abortus and injuries caused by the bacteria in fetal membranes and fetuses. Twenty buffaloes serologically positive for brucellosis were used and subjected to stamping for collection of material from the closed uterus of several months gestation. Fetal age was determined by ultrasound examination and the size of fetuses was measured at necropsy. The samples were subjected to histopathology and qPCR. From the second month of pregnancy on it was possible to detect the presence of B. abortus DNA in amniotic fluid, allantoic liquid and uterus, and from the fifth month on in placenta, heart, spleen, kidney, lung, intestine, liver and lymph nodes of the fetuses. The main pathological findings were fibrinous suppurative necrotic placentitis, and chronic endometritis...

Different resistance patterns of reference and field strains of Brucella abortus

The aim of this study was to evaluate the growth of the B. abortus reference strains and field isolates on media containing different inhibitor agents. Reference strains were seeded on tryptose agar containing: i-erythritol (1.0 mg/mL), fuchsin (20 μg/mL and 80 μg/mL), thionin (2.5 μg/mL and 10 μg/mL), rifampicin (200 μg/mL) and safranin O (200 μg/mL). Field isolates were tested only on media containing i-erythritol, rifampicin and thionin. Furthermore, each suspension was also inoculated on tryptose agar incubated in air, to test its ability to grow without CO2. Sensitivity to fuchsin was similar among reference strains evaluated. Growth of S19, 544 and 2308 but not RB51 were inhibited on media containing rifampicin. Medium with safranin O showed no inhibition for RB51, 544 and 2308, but it partially inhibited the S19 growth as well as medium containing i-erythritol. Treatment/control growth ratio for 2308 on tryptose agar containing thionin (2.5 μg/mL) was approximatelly 1.0, whereas S19 and RB51 showed 0.85 and 0.89 ratios, respectively. Growth of 544, S19 and RB51 but not 2308 was completely inhibited on medium with thionin (10 μg/mL). All field strains grew on medium containing i-erythritol, but were completelly inhibited by rifampicin. With exception of A1 (B. abortus biovar 3) all field isolates grew on medium with thionin, although some strains showed a treatment/control growth ratio of 0.75–0.80 (10 μg/mL). These results showed that tryptose agar with thionin, i-erythritol or rifampicin could be useful for differentiating vaccine, challenge and field strains of B. abortus.

Caracterização morfológica e imuno-histoquímica de lesões em casos de aborto bovino bacteriano e viral no sul de Minas Gerais / Morphological and immunohistochemical characterization of the lesions in cases of bacterial and viral bovine abortion in southern Minas Gerais, Brazil

O presente estudo avaliou a participação de agentes bacterianos e virais em abortos em bovinos de propriedades rurais do sul de Minas Gerais. Foi realizada análise histopatológica e imuno-histoquímica dos casos de aborto recebidos pelo Setor de Patologia Veterinária da Universidade Federal de Lavras no período de 1999 a 2013. De 60 fetos analisados, em 30 (50%) foram observadas lesões microscópicas. Destes, oito apresentavam lesões compatíveis com infecção por agentes bacterianos e três apresentaram lesões sugestivas de agentes virais. Dos abortos bacterianos, um feto tinha lesões compatíveis com leptospirose, caracterizadas por icterícia e colestase, nefrite intersticial linfoplasmocítica e nefrose tubular. Sete fetos apresentaram pneumonia ou broncopneumonia purulenta; num deles havia também pleurite e peritonite fibrinosas; e em dois desses fetos houve imunomarcação para Brucella abortus. Dos três fetos com lesões sugestivas de aborto viral ocorreu imunomarcação anti-Herpesvírus bovino em um. Os resultados demonstram a ocorrência de abortos de origem bacteriana e viral na Região do estudo e que medidas profiláticas devem ser adotadas nas propriedades. O trabalho demonstra também que a imuno-histoquímica (IHQ); associada à histopatologia; é uma ferramenta útil e viável para o diagnóstico, especialmente quando provas microbiológicas e/ou sorológicas não estão disponíveis.

The paper evaluates the participation of bacterial and viral agents in bovine abortions in farms of southern Minas Gerais state, Brazil. Histopathological and immunohistochemical analysis was performed in aborted fetuses of cattle received by the Setor de Patologia Veterinária, Universidade Federal de Lavras, from 1999 to 2013. From 60 fetuses studied, 30 (50%) had microscopic lesions. From these, eight had lesions consistent with bacterial agents and three had lesions suggestive of viral agents. In the bacterial abortions, one fetus presented lesions compatible with leptospirosis, characterized by jaundice, cholestasis, lymphoplasmacytic intersticial nephritis, and tubular nephrosis. Seven fetuses had purulent pneumonia or bronchopneumonia and one of them had also fibrinous pleuritis and peritonitis; two of them presented positive immunostaining for Brucella abortus. One of the three fetuses with lesions of viral infection revealed positive imunostaining for bovine herpesvirus. The results showed that abortions of bacterial and viral origin occur in the Region of this study and prophylactic measures should be adopted on the farms. This study also demonstrates that immunohistochemistry associated with histopathology is a useful and viable tool for the diagnosis, especially when microbiological and/or serological tests are not available.

Molecular detection of Brucella species in patients suspicious of Brucellosis from Zanjan, Iran

Brucella is an intracellular pathogen capable of infecting animals and humans. The aim of this study was to identify Brucella spp in sera of high risk individuals by a polymerase chain reaction (PCR)-based method. A total of 180 patients suspected to have Brucellosis were examined by serological tests. To establish a PCR protocol for diagnosis of active brucellosis, DNA was extracted from the serum samples by using a commercial kit. PCR amplification was done for detection of Brocella DNA using BCSP31 target gene and IS711 locus. The PCR assay showed that an amplicon of 223 bp was obtained in 73.8% (133/180) of the tested sera using primers (B4/B5) derived from a gene encoding the 31-kDa Brucella abortus antigen. In another PCR, an amplicon of 498 bp was obtained in 63.8% (115/180) of the samples using Brucella abortus-specific primers derived from a locus adjacent to the 3'-end of IS711, and also an amplicon of 731 bp was produced in 4.4% (8/180) of the tested samples using Brucella melitensis-specific primers. When the Wright method was used as a gold standard, the sensitivity and specificity of the PCR technique for genus identification were found to be 96 and 80.7%, respectively. However, the sensitivity value obtained with the species-specific PCR method was 82%, and specificity was similar to that previous reported. This is the first report of a high frequency of Brucella abortus in patients suspicious of Brucellosis from the Zanjan province.

Detecção de Brucella abortus em tecidos bovinos utilizando ensaios de PCR e qPCR / Detection of Brucella abortus in bovine tissue using PCR and qPCR

Objetivou-se no presente estudo avaliar as técnicas reação em cadeia da polimerase (PCR) e PCR em Tempo Real (qPCR) para detectar Brucella abortus, a partir de tecidos bovinos com lesões sugestivas de brucelose. Para isto, 21 fragmentos de tecidos bovinos coletados em abatedouros de Mato Grosso do Sul foram processados e submetidos ao cultivo microbiológico e extração do DNA genômico para realização das reações de PCR e qPCR. No cultivo microbiológico, oito amostras apresentaram crescimento bacteriano e cinco foram confirmadas como B. abortus por PCR. Diretamente das amostras de tecido, DNA do gênero Brucella (oligonucleotídeos IS711) foi detectado em 13 (61,9 por cento) amostras de tecido e 17 (81 por cento) amostras de homogeneizado. Já com os oligonucleotídeos espécie-específicos BruAb2_0168F e BruAb2_0168R, 14 (66 por cento) amostras de tecido e 18 (85,7 por cento) amostras de homogeneizado foram amplificadas. Seis amostras positivas na PCR espécie-específica foram sequenciadas e o best hit na análise BLASTn foi B. abortus. Na qPCR, 21 (100 por cento) amostras de tecidos e 19 (90,5 por cento) amostras de homogeneizado foram positivas para B. abortus. Dez amostras de DNA de sangue bovino de rebanho certificado livre foram utilizadas como controle negativo nas análises de PCR e qPCR utilizando-se os oligonucleotídeos BruAb2_0168F e BruAb2_0168R. Na PCR nenhuma amostra amplificou, enquanto que na qPCR 2 (20 por cento) amplificaram. Conclui-se que as duas técnicas detectam a presença de B. abortus diretamente de tecidos e homogeneizados, porém a qPCR apresentou maior sensibilidade. Os resultados obtidos indicam que a qPCR pode representar uma alternativa rápida e precisa para a detecção de B. abortus diretamente de tecidos, e ser utilizada em programas de vigilância sanitária, por apresentar sensibilidade e especificidade satisfatórias.

The aim of the study was to evaluate the technical polymerase chain reaction (PCR) and Real-Time PCR (qPCR) to detect Brucella abortus from bovine tissues with suggestive lesions of brucellosis. For this, 21 fragments of bovine tissues collected at abattoirs of Mato Grosso do Sul were processed and subjected to microbiological culture and extraction of genomic DNA to perform the PCR reactions and qPCR. Eight samples of microbiological culture showed bacterial growth and five samples were confirmed as B. abortus by PCR. DNA of Brucella (IS711 primers) was detected in 13 (61.9 percent) directly from tissue samples and 17 (81 percent) from tissue homogenate samples. With the species-specific set of primers BruAb2_0168F and BruAb2_0168R, 14 (66 percent) tissue samples and 18 (85.7 percent) tissue homogenate samples were positive. Six positive samples in the species-specific PCR were sequenced and the best hit in the BLASTn analysis was B. abortus. By qPCR, 21 (100 percent) tissue samples and 19 (90.5 percent) tissue homogenate samples were positive for B. abortus. Ten samples of DNA from bovine blood from an accredited-free herd were used as negative control in PCR and qPCR analysis using the primers BruAb2_0168F and BruAb2_0168R, and no one amplified by PCR, whereas two samples were amplified by qPCR (20 percent). In conclusion, both techniques detect the presence of B. abortus directly from tissues and homogenized, but the qPCR showed high sensitivity. The results indicate that qPCR can represent an alternative tool for faster and more accurate detection of B. abortus directly from tissues, and use in health surveillance programs by presenting satisfactory sensitivity and specificity.

Detección de un complejo clonal con el genotipo de Brucella abortus biovariedad 2 como fundador en aislamientos de B. abortus de Argentina / Detection of a clonal complex with Brucella abortus biovar 2 genotype as founder in B. abortus isolates from Argentina

Brucella abortus es el agente causal de la brucelosis bovina, enfermedad zoonótica que se encuentra ampliamente distribuida en el mundo. Actualmente existen ocho biovariedades de B. abortus. En Argentina se encuentra con mayor frecuencia la biovariedad 1, pero también se suele aislar la biovariedad 2, que es más patogénica que la anterior. Resulta necesario contar con métodos de tipificación que tengan la resolución suficiente para permitir el seguimiento epidemiológico de los brotes de brucelosis y de los programas de control de la enfermedad. Debido a la gran homogeneidad genética que existe entre las distintas especies del género Brucella, ha sido dificultoso el desarrollo de herramientas moleculares para realizar el análisis epidemiológico de los aislamientos. La publicación del genoma de varias especies de Brucella facilitó el diseño de estas herramientas. El objetivo del presente trabajo fue emplear un esquema de análisis multilocus de VNTR en aislamientos de Argentina obtenidos en nuestro laboratorio. De los 56 aislamientos analizados se obtuvieron 47 perfiles genotípicos diferentes. El empleo de este esquema permitió asignarles a dichos aislamientos la biovariedad correspondiente. A través del análisis goeBURST se pudo relacionar a todos los genotipos entre sí, y además, proponer al genotipo de la biovariedad 2 como fundador.

Brucella abortus is the causative agent of bovine brucellosis, a worldwide zoonosis. Up to date, eight biovars of B. abortus have been described. In Argentina, biovar 1 is the most frequently isolated. However, biovar 2, which is more pathogenic than biovar 1, is also found. Molecular methods for subtyping isolates are necessary for allowing epidemiological surveillance and control of eradication programs. Due to the genetic homogeneity of the genus Brucella, the development of molecular typing tools has been difficult. The publication of microorganism genomes facilitates the design of this approach. The aim of this work was to employ a Multiple Locus VNTR Analysis (MLVA) scheme for strains from Argentina isolated in our laboratory. From the 56 isolates analyzed, 47 different genotypic profiles were obtained. All the strains typed as biovar 2 showed the same profile. This scheme allowed assigning each isolate to the biovar it belongs to. All the genotypes were related using the goeBURST analysis and biovar 2 was proposed as founder.

PCR Multiplex fluorescente para detecção de bactérias em sêmen bovino / Fluorescent Multiplex PCR for detection of bacteria in semen bovine

Este estudo teve como objetivo avaliar o limiar de detecção da técnica de PCR multiplex fluorescente aliada a eletroforese capilar na detecção de agentes infecciosos em amostras de sêmen experimentalmente contaminadas com concentrações decrescentes das bactérias Brucella abortus, Leptospira interrogans sorovar pomona, Campylobacter fetus e Haemophilus somnus. Amostras de sêmen bovino foram experimentalmente contaminadas com concentrações decrescentes de bactérias obtidas através de diluições seriadas na base 10 de modo a obter-se amostras contendo desde 1 vez até 10-7 bactérias/mL a partir da concentração inicial de Leptospira pomona, Brucella abortus, Campylobacter fetus e Haemophilus somnus. As diluições foram efetuadas individualmente para cada bactéria, bem como nas diferentes concentrações necessárias para a padronização do teste de multiplex PCR. As extrações de DNA de todas as soluções contendo espermatozóides e bactérias analisadas no presente estudo foram realizadas segundo protocolo descrito por Heinemann et al. (2000). Os produtos de PCR multiplex foram avaliados por eletroforese em gel de poliacrilamida 8% e separação eletroforética por sistema capilar em equipamento automático de análise de fragmentos de DNA MegaBace. Observou-se a amplificação de fragmentos de 193pb, 330pb, 400pb e 415pb a partir do DNA de B. abortus, L. pomona, H. somnus, C. fetus, respectivamente. Na análise por eletroforese capilar de produtos da PCR multiplex do DNA para detecção simultânea dos quatro patógenos observou-se a sinal de positividade até a diluição de 10-3 bactérias/mL vezes da concentração inicial da solução estoque de cada bactéria. A técnica de PCR multiplex aliada à eletroforese capilar foi usada pela primeira vez para o diagnóstico direto de quatro bactérias patogênicas no sêmen, demonstrando ser um método rápido na detecção de bactérias causadoras de doenças reprodutivas.

This study aimed to evaluate the threshold of detection of fluorescent multiplex PCR coupled with capillary electrophoresis for detection of infectious agents in semen samples from experimentally infected with decreasing concentrations of the bacteria Brucella abortus, Leptospira interrogans serovar pomona, Campylobacter fetus and Haemophilus somnus. Samples of bovine semen were experimentally infected with decreasing concentrations of bacteria obtained from serial dilutions in the base 10 so as to obtain samples containing a long time until 10-7 bacteria/mL from the initial concentration of Lepstospira pomona, Brucella abortus, Haemophilus somnus and Campylobacter fetus. The dilutions were made individually for each bacterium, as well as in different concentrations needed to standardize the multiplex PCR test. DNA extractions of all solutions containing sperm and bacteria analyzed in this study were performed according to protocol described by Heinemann et al. (2000). The multiplex PCR products were analyzed by electrophoresis on 8% polyacrylamide gel and capillary electrophoretic separation system for automated equipment in the analysis of DNA fragments MegaBACE. We observed amplification of fragments of 193pb, 330pb, 415pb and 400bp from the DNA of B. abortus, L. pomona, H. somnus, C. fetus respectively. The analysis by capillary electrophoresis of multiplex PCR products of DNA for simultaneous detection of the four pathogens was observed by detecting the dilution of 10-3 bacteria / mL times the initial concentration of the stock solution of each bacterium. The multiplex PCR coupled with capillary electrophoresis was first used for the direct diagnosis of four pathogenic bacteria in semen, proving to be a rapid method to detect bacteria that cause reproductive disorders.

Detecção de anticorpos anti - brucella abortus em cães da comunidade Porto Camargo - Pr / Detección de anticuerpos anti - brucella abortus en perros de la comunidad Porto Camargo - Pr / Detection of anti - brucella abortus dogs in the community of Porto Camargo - Pr

As bactérias do gênero Brucella são responsáveis por grande parte dos abortos e casos de infertilidade nos animais domésticos. Dentre as espécies conhecidas, a que mais acomete o cão é a B. canis, porém, em certas condições, também podem ser afetados com a B. abortus. Este trabalho teve como objetivo principal detectar anticorpos anti-B. abortus em cães domiciliados da comunidade de Porto Camargo ? PR. Para isso, foram coletadas 42 amostras de sangue de cães oriundos desta comunidade, que foram examinadas pelo Método de Soroaglutinação Rápida para detecção de anticorpos anti-Brucella. Obteve-se 0,0% de resultados positivos para anticorpos anti-Brucella abortus, demonstrando a não contaminação dos cães.

Bacteria of the genus Brucella are responsible for most cases of abortions and infertility in domestic animals. Among the known species, the one that affects the dog is the B. kennels, however, under certain conditions, may also be affected with B. abortus. This work aimed to detect anti-B. abortus house dogs in the community of Porto Camargo- Paraná, Brazil. So it was collected 42 blood samples from dogs in this community, which were examined by Rapid Agglutination Test Method for detection of antibodies to Brucella. We obtained 0.0% positive results for anti-Brucella abortus, showing no contamination of the dogs.

Las bacterias del género Brucella son responsables por gran parte de los abortos y casos de infertilidad en los animales domésticos. Entre las especies conocidas, la que más acomete el perro es la B.canis, todavía en algunas condiciones, también pueden ser afectados con la B. abortus. Esta investigación buscó detectar anticuerpos anti-B.abortus en perros domiciliados en la comunidad de Porto Camargo-PR. Para tanto, fueron colectadas 42 muestras de sangre de perros oriundos de esta comunidad, que fueron examinadas por el Método de Suero aglutinación Rápida para detección de anticuerpos anti-Brucella. Se alcanzó 0,0% de resultados positivos para anticuerpos anti-Brucella abortus, no demostrando contaminación de los perros.

Detecção de anticorpos anti - brucella abortus em humanos na cidade ribeirinha de Porto Figueira - Paraná / Detección de anticuerpos anti - brucella abortus en humanos de la ciudad de Porto Figueira - Paraná / Detection of antibody anti - brucella abortus in human being in the riverside town of Porto Figueira - Parana - Brazil

A brucelose é uma doença infecto-contagiosa provocada por bactérias do gênero Brucella, que ocasiona problemas de saúde importantes nos indivíduos que ingerem alimentos contaminados ou mantém um contato com animais infectados, podendo determinar quadros agudos, subagudos e principalmente, crônicos. Objetivou-se detectar anticorpos anti-Brucella abortus em humanos que vivem na cidade ribeirinha de Porto Figueira, PR, de forma a verificar o grau de infecção nesses humanos. Foram coletadas 99 amostras de sangue humano, e foram examinadas pelo Método de Soroaglutinação para detecção de anticorpos anti-Brucella abortus. Obteve-se 0,0% de resultados positivos para anticorpos anti-Brucella abortus, demonstrando a não contaminação dos humanosbteve-se 0,0% de resultados positivos para anticorpos anti-Brucella abortus, demonstrando a não contaminação dos humanos.

Brucellosis is an infectious disease caused by bacteria of the genus Brucella, which causes major health problems in people who ingest contaminated food or maintains contact with infected animals, may determine the acute, subacute and especially chronic. The objective was to detect antibodies to Brucella abortus in humans living in the riverside town of Porto Figueira, PR, in order to verify the degree of infection in these people. We collected 99 samples of human blood, and were examined by the agglutination test method for detecting antibodies to Brucella abortus. We obtained 0.0% positive results for anti-Brucella abortus, showing no contamination of humans.

La brucelosis es una enfermedad infectocontagiosa provocada por bacterias del género Brucella, que ocasiona problemas de salud importantes en los individuos que ingieren alimentos contaminados o mantienen contactos con animales infectados, pudiendo determinar cuadros agudos, subagudos y principalmente crónicos. Se buscó detectar anticuerpos anti-Brucella abortus en humanos que viven en la ciudad de Porto Figueira ? PR, cerca a un río, de forma a verificar el grado de infección en esos humanos. Se colectó 99 muestras de sangre humano, y fueron examinadas por el Método de Suero aglutinación para detección de anticuerpos anti-Brucella abortus. Se alcanzó 0,0% de resultados positivos para anticuerpos anti-Brucella abortus, no demostrando contaminación de los humanos.

Brucelose bovina no estado da Paraíba: estudo retrospectivo / Bovine brucelosis in the state of Paraíba: a retrospective survey

O objetivo do presente trabalho foi determinar a frequência de propriedades positivas (focos) e de animais soropositivos para a brucelose bovina no Estado da Paraíba. Foram utilizados dados da Agência de Defesa Agropecuária do Estado, coletados de suas 23 microrregiões, durante o período de janeiro de 2008 a julho de 2009. Durante esse período, foram examinadas 11.149 propriedades, e 55.691 soros de bovinos foram submetidos ao diagnóstico de brucelose. Para o diagnóstico sorológico, foi utilizado o teste do antígeno acidificado tamponado (AAT). Uma propriedade foi considerada foco quando apresentou pelo menos um animal soropositivo. Das propriedades investigadas, 104 (0,93%) apresentaram pelo menos um animal soropositivo e, dos animais analisados, 199 (0,36%) foram soropositivos. Houve diferença significativa (p < 0,001) na proporção de fêmeas (0,47%) e machos (0,04%) soropositivos.

The aim of this study was to determine the frequency of positive herds (foci) and seropositive animals for bovine brucellosis in the state of Paraíba, Northeast region of Brazil. Data from the Agency of Agricultural Protection in the state, collected from its 23 microregions, during the period from January 2008 to July 2009, were used. During this period, 11,149 herds were examined, and 55,691 cattle sera were submitted to the diagnosis of brucellosis. For serological diagnosis the rose bengal test was used. A herd was considered a focus when it presented at least one seropositive animal. Of the herds investigated, 104 (0.93%) had at least one seropositive animal, and of the animals examined, 199 (0.36%) were seropositive. There was a significant difference (p < 0.001) in the proportion of seropositivity for females (0.47%) and males (0.04%).

Soropositividade e lesões sugestivas de brucelose em bovinos abatidos no estado de Tocantins, Brasil / Serumpositivity and lesions suggestive of brucellosis in cattle slaughtered in Tocantins state, Brazil

De outubro a dezembro de 2007, 845 amostras de sangue foram coletadas de 836 vacas (98,9%) e nove touros (1,1%), em um matadouro com inspeção federal no Estado do Tocantins. Cento e quarenta e duas amostras [(16,8%) IC 95% 14,3-19,4] tiveram reação positiva ao teste do antígeno acidificado e tamponado de Brucella abortus. Um touro foi positivo ao teste. Quinhentos e sessenta e um bovinos (66,3%) procederam do Estado do Pará e 284 (33,7%) do Estado do Tocantins. A prevalência de soropositividade foi de 17,2% [IC (95%) 13,6 - 19,9] e de 16,6% [IC (95%) 13,0 - 22,2] para o gado do Pará e Tocantins, respectivamente. Estas prevalências não são significativamente diferentes (p > 0,05). Nenhuma das vacas tinha registro de vacinação contra brucelose. Os exames "ante e post-mortem" não detectaram qualquer sinal ou lesão sugestiva à brucelose, como descargas vaginais, orquites, artrites ou bursites [(0,00%) IC 95% 0,00-0,43] em todos os bovinos da amostra. Esta situação, associada às altas prevalências da doença e à falta de diagnóstico da brucelose nos rebanhos, aumenta o número de bovinos infectados abatidos sob condições sanitárias inadequadas, o risco de contaminação dos trabalhadores e a colocação no mercado, sem restrição, de carne de animais infectados.

From October to December 2007, 845 blood samples were collected from 836 cows (98.9%) and nine bulls (1.1%), in a slaughterhouse with federal inspection in the state of Tocantins. One hundred and forty-two samples [(16.8%) 95% CI 14.3-19.4] had positive reaction to the plate agglutination test carried out with acidified and buffered antigen of Brucella abortus. One bull was positive to the test. Five hundred and sixty one bovines came from the State of Pará (66.3%) and 284 (33.7%) came from the State of Tocantins. The prevalence of serum positivity was 17.2% [CI (95%) 13.6 ­ 19.9] and 16.6% [CI (95%) 13.0 ­ 22.2] for cattle came from Pará and Tocantins, respectively, with no significant difference between these frequencies (p > 0.05). None of the cows had record of vaccination against brucellosis. "Ante and post-mortem" examinations could not find any sign or lesion attributable to brucellosis, such as vaginal discharges, joint inflammation or bursitis [(0.00%) 95% CI 0.00-0.43] in all bovines sampled. This situation, coupled with the high prevalence of the disease and the lack of brucellosis diagnostic at herds, increases the number of infected cattle slaughtered under inadequate sanitary conditions, the risk of contamination of workers and placing on the market, without restriction, the meat from infected animals.

Endocarditis por Brucella abortus: Sobrevivir a los 74 años de edad / Brucella abortus endocarditis: Survival of a 74 year old patient

Brucellosis is not frequent in Chile but it may present with life threatening complications like endocarditis. The case reported refers to a 74 year old man admitted to the Infectious Diseases Hospital Dr. Lucio Córdova in Santiago. He had been febrile for 3 months with no specific symptoms. The trans-esophageal echocardiography confirmed múltiple large vegetations and important involvement of the aortic valve. Blood cultures yielded Brucella abortus. The patient required cardiac surgery, along with antibiotics, and he had a satisfactory outcome, being alive at the moment of this report???. Brucellosis can be the responsible for prolonged fever of unknown origin. It is necessary to take in mind brucellosis to obtain the specific laboratory tests. For a best prognosis an early treatment with associated antibiotics for at least 4 a 6 weeks is important. If endocarditis is present valve replacement is often necessary.

Brucelosis es una infección poco frecuente en Chile pero que puede presentar algunas complicaciones graves como endocarditis. Se presenta el caso de un paciente de 74 años que ingresa al Hospital de Enfermedades Infecciosas Dr Lucio Córdova (HLC) de Santiago, con un síndrome febril de 3 meses de evolución, sin síntomas específicos. El ecocardiograma trans-esofágico mostró múltiples vegetaciones en válvula aórtica y en los hemo-cultivos se desarrolló Brucella abortus. El paciente recibió tratamiento médico-quirúrgico en el Instituto de Enfermedades Respiratorias y Cirugía de Tórax (INERYCT), evolucionando satisfactoriamente. Ante un paciente con un síndrome febril prolongado debe tenerse presente la posibilidad diagnóstica de brucelosis de modo de solicitar los exámenes específicos en forma oportuna y, si se confirmase, iniciar precozmente el tratamiento. Este debe comprender un esquema asociado de antimicrobianos, que se mantendrá por al menos 4 a 6 semanas. En caso de endocarditis, con frecuencia se requerirá también de reemplazo valvular.

Pesquisa de anticorpos anti-Brucella canis e anti-Brucella abortus em cães errantes da cidade de SãoJoão da Boa Vista, Estado de São Paulo, Brasil(2002-2003) / Research of antibodies anti-Brucella canis and anti-Brucella abortus inwanderring dogs in São João da Boa Vista, State of São Paulo, Brazil(2002-2003)

A brucelose canina é uma importante zoonose que tem sido investigada freqüentemente em cães como medida sanitária de controle da saúde pública. Foi conduzido um estudo sorológico para investigar a freqüência da brucelose canina por Brucella canis e por Brucella abortus, em 500 cães errantes na cidade de São João da Boa Vista/SP - Brasil, utilizando as técnicas de imunodifusão em gel de ágar (antígeno de parede celular de B. ovis) e imunoaglutinação em placa com antígeno acidificado tamponado. Este estudo mostrou baixa frequência de cães infectados por B. canis 4/500 (0,8%) e ausência de soros positivos para B. abortus

Dogs brucellosis may cause reprodutive problems and there are a risk factors for human health. The prevalence of brucellosis due to Brucella canis and Brucella abortus was investigated in dogs living in urban areas of São João da Boa Vista/SP - Brasil. For this purpose, 500 blood sample were collected and serum analysed by agar gel immuno diffusion test and Rose-Bengal test. The frequency of brucellosis due to B. canis was 4/500 (0,8%) and negative for B. abortus.

Estabilidade do antígeno de célula total de Brucella abortus para uso no diagnóstico sorológico da brucelose bovina pela reação de fixação de complemento / Stability of Brucella abortus whole cell antigen for use in the serological diagnosis of bovine brucellosis by the complement fixation test

A reação de fixação de complemento é um dos testes usados no diagnóstico confirmatório da brucelose bovina, e para sua realização emprega-se o mesmo antígeno usado na prova de soroaglutinação lenta, porém não foi possível encontrar na literatura estudos sobre a estabilidade desse antígeno para uso na prova de fixação de complemento, de modo a estabelecer um prazo de validade para o mesmo. Por isso, esta investigação teve por objetivo avaliar a estabilidade do antígeno de célula total de Brucella conservado sob refrigeração, para uso na reação de fixação de complemento. Analisaram-se 14 partidas de antígeno, preparado com Brucella abortus amostra 1119/3 e padronizado para uso na prova de soroaglutinação lenta, com tempo de fabricação variando de 9 meses a 23 anos e 11 meses. Testaram-se 167 soros bovinos com títulos variáveis de anticorpos contra Brucella, adotando-se a técnica com incubação a 37ºC nas duas fases da reação e 5 unidades hemolíticas 50 por cento de complemento. Considerou-se como positivo o soro com pelo menos 25 por cento de fixação de complemento na diluição 1:4. Compararam-se os resultados obtidos com as 13 partidas de antígeno com aqueles obtidos com a partida com 9 meses de fabricação, usando o teste de chi2 de McNemar e o coeficiente kappa. A grande maioria dos soros apresentou resultados muito próximos quando testados com as diversas partidas de antígeno, e não se observou relação entre tempo de fabricação do antígeno e diferenças nos resultados obtidos.

The complement fixation test is used worldwide in the confirmatory diagnosis of bovine brucellosis. For this technique the antigen is the same as the one used in the tube agglutination test. However, literature is poor in information about the stability of the whole cell Brucella antigen for use in the complement fixation test to establish a time of validity of the antigen. Hence the aim of this investigation was to evaluate the stability of this antigen under refrigeration for use in the complement fixation test. Fourteen batches of antigen prepared with Brucella abortus strain 1119/3, produced from 9 months to 23 years and 11 months before, were analysed. One hundred and sixty-seven cattle sera with varying titres of antibodies to Brucella were tested through the warm complement fixation microtechnique with five 50 percent haemolytic units of complement. Sera with at least 25 percent of complement fixation in dilution 1:4 were considered positive. The results with 13 of the antigen batches were compared with the results obtained with the batch produced 9 months before by the McNemar chi2 test and kappa statistic. The oldest antigen batch gave a higher proportion of sera titres which were exactly the same observed with the 9-month-batch (90.4 percent), and the antigen produced 4 years and 3 months before the test gave de lowest proportion of sera with the same titre of the 9-month-antigen (73.7 percent). The comparison of the results after being classified as positive and negative showed that the highest proportion of agreed results was observed with the antigen produced 21 years and 4 months before (98.8 percent, kappa 0.98). The antigen with the lowest proportion of agreed results was the one produced 3 years and 2 months before (91.6 percent, kappa 0.84). The results of the study show that most sera gave very similar results with all antigen batches evaluated, and that there was no relationship between the period of antigen production...

Brucelosis en un escolar / Brucellosis in a student

We describe the case of a student with a history of two and a half months of fever, hepatosplenomegaly, cutaneous, hematological and bone manifestations, within an epidemiological background compatible with the diagnosis of Brucellosis. Diagnosis of Brucella abortus was confirmed by serology and positive blood cultures. Clinical manifestations of brucellosis and diagnostic and treatment strategies are reviewed.

Se comunica el caso de un escolar, que presenta un síndrome febril prolongado de 2 meses y medio de evolución, con hepatoesplenomegalia, manifestaciones cutáneas, hematológicas y óseas que, sumadas a antecedentes epidemiológicos sugerentes, permitieron diagnosticar un cuadro de brucelosis. El diagnóstico fue confirmado por serología y hemocultivos positivos a Brucella abortus. Se relata la evolución clínica, tratamiento y seguimiento del paciente, analizamos las formas clínicas de presentación de esta enfermedad, las dificultades en el diagnóstico y seguimiento, como los tratamientos recomendados en la actualidad.